ADN recombinante en la naturaleza y ADN recombinante artificial en las enfermedades isquémicas del corazón

ADN recombinante en la Naturaleza

ADN recombinante es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN. El ADN es integrado con genes o artes de genes de distintos organismos de la misma o de diferentes especies. Se lo puede ver en las bacterias, por un proceso llamado transformación, en el que la bacteria incorpora ADN del medio ambiente. también puede provenir de otras bacterias, por conjugación o transducción.

ADN recombinante artificial en las enfermedades isquémicas del corazón

La estreptoquinasa recombinante es una proteína obtenida a partir del Estreptococo hemolítico del grupo C, actúa como agente fibrinolítico, capaz de convertir el plasminógeno humano presente en la sangre en plasmina, una enzima proteolítica que degrada la fibrina que forman los coágulos en productos de degradación solubles. Muy utilizada en algunos casos, bajo indicaciones médicas, para disolver coágulos sanguíneos en infartos del miocardio, la trombosis venosa profunda, etc.

Referencias

Gama Fuertes, M. d. (s.f.). Bilogía Biogénesis y microorganismos. México: Prentice Hall. Obtenido de https://books.google.com.ec/books

Sánchez-Labañino, M. (Febrero de 2015). Scielo. Obtenido de Mejoras en la etapa de conformación del ingrediente farmacéutico activo de la estreptoquinasa recombinante: http://scielo.sld.cu/pdf/rtq/v35n2/rtq04215.pdf

 

Determinación de la expresión de proteínas por WESTERN BLOT en enfermedades isquémicas de corazón

Tema: Modificaciones en el nivel de expresión de proteínas asociadas con el metabolismo energético en ventrículo izquierdo de ratas obesas e hipertensas

Objetivo: Determinar si el aumento del peso corporal podría afectar los requerimientos energéticos del corazón y ser causa de la modificación en la expresión de proteínas relacionadas con el metabolismo energético. 

Muestra: ventrículos izquierdos de ratas WKY macho y ratas SHR

Tipo de molécula: proteinas

Extracción:

           Lisis: tejidos homogeneizados se solubilizaron en buffer Laemmli que contiene 2-mercaptoetanol
           Separación: proteínas se separaron en geles desnaturalizantes de poliacrilamida y SDS al 15%
           Purificación: ácido bicintiónico

Proteínas a identificar: proteínas triosafosfato isomerasa, fructosa 1,6 bifosfato aldolasa, malato deshidrogenasa, NADH deshidrogenasa y la α-ATP sintasa mitocondrial

Tipo de prueba: WESTERN BLOT

Visualización: Las proteínas se detectaron por quimioluminiscencia mejorada y evaluadas por densitometría

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Prueba de PCR para enfermedad isquémica del corazón

Tema: Construcciones plasmídicas de las variantes silvestre y polimórfica de la región 3’-utr del gen calu.

Objetivo: Estudiar la relevancia del polimorfismo rs1043550 afectando la región 3’-UTR del gen CALU y evaluar la participación de calumenina y su regulación en el proceso de la calcificación vascular

Muestra: muestra sanguínea (4 ml)

Ácido nucleico: DNA genómico

Gen: gen LUC (p3U-CALUa)

Tamaño en pares de bases: ≥ 100 pb

Tipo de pcr: PCR convencional

Visualización: Electroforesis

Enzima: ADN Polimerasa

Gen o genes a identificar: 3’-UTR del gen CALU

Extracción:

           Lisis: Shock térmico

           Separación: fenol cloroformo

           Purificación: etanol

Pasos:

           Desnaturalización: 95°C por 50 seg.

           Hibridación: 66 ciclos de 60-64°C por 50 seg.

           Elongación:  1 ciclo de 72-74°C por 13-20 seg.

  

Referencias:

Jober, E. (junio de 2016). UNIVERSIDAD DE MURCIA. Obtenido de Mecanismos Fisiopatológicos del Remodelado y la: https://www.google.com.ec/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwiS5f3nrf_TAhUDPCYKHZ-9CmYQFgg3MAM&url=https%3A%2F%2Fdigitum.um.es%2Fjspui%2Fbitstream%2F10201%2F51571%2F1%2FTESIS_Eva%2520Jover%2520Garc%25C3%25ADa_DEP%25C3%2593SITO-1.pdf&usg=AFQjCNFLtXL7RMeK00uh0SXzK1Ndb8KBSQ&sig2=Zu5ZPqzV6QFt0-uayXIK8A