Prueba de PCR para enfermedad isquémica del corazón

Tema: Construcciones plasmídicas de las variantes silvestre y polimórfica de la región 3’-utr del gen calu.

Objetivo: Estudiar la relevancia del polimorfismo rs1043550 afectando la región 3’-UTR del gen CALU y evaluar la participación de calumenina y su regulación en el proceso de la calcificación vascular

Muestra: muestra sanguínea (4 ml)

Ácido nucleico: DNA genómico

Gen: gen LUC (p3U-CALUa)

Tamaño en pares de bases: ≥ 100 pb

Tipo de pcr: PCR convencional

Visualización: Electroforesis

Enzima: ADN Polimerasa

Gen o genes a identificar: 3’-UTR del gen CALU

Extracción:

           Lisis: Shock térmico

           Separación: fenol cloroformo

           Purificación: etanol

Pasos:

           Desnaturalización: 95°C por 50 seg.

           Hibridación: 66 ciclos de 60-64°C por 50 seg.

           Elongación:  1 ciclo de 72-74°C por 13-20 seg.

  

Referencias:

Jober, E. (junio de 2016). UNIVERSIDAD DE MURCIA. Obtenido de Mecanismos Fisiopatológicos del Remodelado y la: https://www.google.com.ec/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwiS5f3nrf_TAhUDPCYKHZ-9CmYQFgg3MAM&url=https%3A%2F%2Fdigitum.um.es%2Fjspui%2Fbitstream%2F10201%2F51571%2F1%2FTESIS_Eva%2520Jover%2520Garc%25C3%25ADa_DEP%25C3%2593SITO-1.pdf&usg=AFQjCNFLtXL7RMeK00uh0SXzK1Ndb8KBSQ&sig2=Zu5ZPqzV6QFt0-uayXIK8A